Polymerázová řetězová reakce
«»
Popis:
8. Polymerázová řetězová reakce
V osmdesátých letech 20. století byla vynalezena nová, rychlá a účinná metoda pro klonování DNA - polymerázová řetězová reakce (PCR, angl. polymerase chain reaction). Pomocí této metody můžeme rychle a vysoce selektivně namnožit konkrétní nukleotidové sekvence obsažené v jakékoli DNA (deoxyribonukleové kyselině) za podmínek in vitro. Metoda PCR je dnes hojně využívána např. v diagnostice při analýze onemocnění nebo při průkazu specifických úseků v DNA.
8.1. Princip metody PCR
Princip PCR je založen na využití enzymu DNA-polymerázy pro opakované kopírování templátové (vzorové) molekuly DNA. Syntéza je řízena krátkými oligonukleotidy (primery), které nasedají na templátovou DNA na začátku a konci amplifikovaného fragmentu, každý primer reaguje s jiným vláknem původní dvouřetězcové DNA (viz. obr. 22).
Klíčová slova:
polymerázová řetězová reakce
izolace templátové DNA
izolace
systém kontrol
elektroforéza
využití metody
Obsah:
- Polymerázová řetězová reakce
Princip metody PCR
Základní pojmy
Provedení metody PCR
Izolace templátové DNA
Lýza bakteriálních buněk varem
Extrakce DNA chelexem
Izolace chromozomální DNA fenolovou extrakcí
Izolace DNA pomocí purifikačních kolonek
Příprava PCR reakční směsi
Systém kontrol PCR reakce
Horizontální gelová elektroforéza
Příprava agarózového gelu
Elektroforéza
Vyhodnocení PCR
Využití metody PCR v mikrobiologii potravin
O souborech cookie na této stránce
Soubory cookie používáme pro funkční účely, pro shromažďování a analýzu informací o výkonu a používání stránky.